ChromoTek介紹
德國ChromoTek公司成立于2008年，致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發(fā)與研究，公司擁有強大的研發(fā)團隊，有先進的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質量的實驗數(shù)據(jù)。
德國ChromoTek公司 聯(lián)合中國專業(yè)的生物技術服務提供商－BioTNT,針對中國市場的實際情況，推出全世界可靠的GFP 相關產(chǎn)品。
ChromoTek的產(chǎn)品分類：
一、Nano-Trap系列；以產(chǎn)品結合物為標準，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質粒或細胞系形式)；
四、 高品質抗體（標簽蛋白抗體和普通抗體）；
產(chǎn)品一：
GFP-Trap? —— 值得信賴的科研工具：
Nano-Trap：與agarose beads或者magnetic beads結合，在免疫沉淀或蛋白質相互作用的實驗中，可抓取或純化GFP或RPF融合蛋白。 （優(yōu)點：三好三多）
優(yōu)點一：抗體好---------Nano-Traps采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段（VHHS）；具有分子量小（15Kda）、穩(wěn)定（70℃仍保持穩(wěn)定），高親和力（高特異性性結合GFP蛋白），無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點等優(yōu)點；GFP抗體可以特異性結合綠色熒光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不與RFP衍生蛋白結合。
優(yōu)點二：形式好-------抗體結合了agarose beads（瓊脂糖珠子）或者magnetic beads（磁珠），在IP實驗，COIP ，pulldown，Chip實驗中可以直接取代特異性GFP 抗體+proteinA/G 瓊脂糖珠子；
優(yōu)點三：效果好------孵化時間短（只需5-30min），能夠更好與結合，從細胞提取物或細胞器中定量分離GFP融合蛋白及結合因子
優(yōu)點四：實驗應用多：被廣泛用于免疫沉淀、質譜分析、酶活測定、生物大分子相互作用/親和力實驗、染色質免疫沉淀（ChIP）、蛋白質相互作用分析；
優(yōu)點五：產(chǎn)品多：有GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品，給您提供更多的科研工具！GFP，RFP，GST Trap作為標簽蛋白的特異性純化方法，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap 是用于純化目的蛋白。
優(yōu)點六：樣品類型多：mammalian cells（哺乳細胞）；tissues/ organisms（組織/器官樣本）；bacteria（細菌）；yeast （酵母）；plants （植物樣本）
僅需六個步驟，30min 僅需6個步驟，30min 實驗，Chromotek GFP-Trap?_A的5大實驗應用：
→→ →收集細胞 細胞裂解 平衡beads 結合蛋白 ,加入裂解的細胞 → 清洗beads → 洗脫蛋白
| 免疫沉淀 | 酶活測定 | Co-IP | Pull down | ChIP |
后期實驗 | Western blot | 酶活測定 | 沉淀的蛋白質復合物采用SDS-Page 跑膠，western blot鑒定預測作用蛋白Y，或樣品利用質譜后續(xù)分析。 | 洗脫的復合物；同時進行GFP和第二標簽的western blot 實驗。 | 交聯(lián)反應逆轉，DNA純化，DNA鑒定（如用QPCR 或者chip實驗），同普通CHIP 實驗 |
nano trap替代的產(chǎn)品 | GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GST 標簽蛋白的親和層析柱或瓊脂糖微珠 | GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 |
目的 | 弱GFP蛋白樣品的富集；或后期實驗 | 可以用beads直接測定酶活 | 蛋白-蛋白相互作用，一般驗證體內(nèi)的蛋白互作 | 蛋白-蛋白相互作用，一般驗證體外的蛋白互作 | 蛋白-DNA相互作用 |
（1）實驗不同，裂解的細胞不同；pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二標簽融合蛋白的裂解物；chip實驗為細胞固定步驟，染色質斷裂步驟；
實驗不同，加入的裂解物不同；chip實驗加入的為斷裂的DNA-蛋白復合物；
（2） GFP-Trap 用于IP 實驗（Immunoprecipitation）（免疫沉淀）和Co-IP 實驗（免疫共沉淀） ：
Co-IP 實驗（Co-Immunoprecipitation）（免疫共沉淀）原理圖
| 傳統(tǒng)IP | GFP-Trap用于IP | 傳統(tǒng)Co-IP | GFP-Trap用于Co-IP |
| A | B | C | D |
實驗原理 | 抗體與細胞裂解液或上清中相應蛋白結合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的agarose珠子孵育，得到蛋白復合物，洗脫蛋白。 | 細胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白與GFP-Trap孵育，得到蛋白復合物，洗脫蛋白。 | 細胞非變性條件下裂解，完整胞內(nèi)存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，與X在體內(nèi)結合的蛋白質Y也能沉淀下來。結合的實驗原理同A/B | |
目的 | 得到純化的蛋白或進行后期實驗 | 同A | 研究蛋白質相互作用 | |
后期實驗 | 洗脫的蛋白采用SDS-Page 跑膠，采用GFP 抗體western blot進行鑒定。 | 沉淀的蛋白質復合物采用SDS-Page 跑膠，western blot 鑒定，也可利用質譜進行后續(xù)分析。 | ||
時間 | 長，超過一天 | 短，30min | 同A | 同B |
步驟 | 多，超過20個步驟 | 少，僅需6個步驟 | 同A | 同B |
特異性 | 普通抗體特異性不高 | 羊駝抗體，特異性高 | 同A | 同B |
使用產(chǎn)品 | 可選用特異性抗體 或GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GFP抗體-瓊脂糖珠子，RFP-Trap，GST-Trap，Dnmt1-Trap | 同A | 同B |
適用性 | 通用方法，適合面寬 | 有GFP，RFP，GST，Dnmt1-Trap等4個品種的標簽蛋白Trap 可選 | 同A | 同B |
產(chǎn)物 | 純度不高 | 純度高，對比見下左圖 |
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Nano-Traps主要產(chǎn)品見表：
| 品牌 | 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 價格 |
GFP-Trap? | Chromo tek | gta-10 | GFP-Trap?, coupled to agarose | 10 rxns | 2000 |
Chromo tek | gta-20 | GFP-Trap?, coupled to agarose | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | gta-100 | GFP-Trap?, coupled to agarose | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | gta-200 | GFP-Trap? coupled to agarose | 200 rxns | 48240 | |
Chromo tek | gta-400 | GFP-Trap? coupled to agarose | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | gtak-20 | GFP-Trap? coupled to agarose kit | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | gtm-20 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | gtm-100 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | gtm-200 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 200 rxns | 5360 | |
Chromo tek | gtp-96 | GFP-multiTrap?, black 96 well plate | 1 pc | 4100 | |
Chromo tek | gtp-96 | GFP-multiTrap?, black 96 well plate | 5 pc | 15600 | |
Chromo tek | gtm-400 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | gtmk-20 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads kit | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | gt-250 | GFP-Trap? free protein | 250 μg | 4500 | |
RFP-Trap? | Chromo tek | rta 10 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 10rxns | 2000 |
Chromo tek | rta 20 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 20rxns | 6700 | |
Chromo tek | rta 100 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | rta200 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 200rxns | 5360 | |
Chromo tek | rta 400 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 400rxns | 84330 | |
Chromo tek | rtak-20 | RFP-Trap?, coupled to agarose, | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | rt-250 | RFP-Trap?, free protein | 250 μg | 4500 | |
GST-Trap | Chromo tek | stm-10 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 10 rxns | 2000 |
Chromo tek | stm-20 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | stm-100 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | stm-200 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 200 rxns | 48240 | |
Chromo tek | stm-400 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | stmk-20 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads, kit | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | st-250 | GST-Trap?, free protein | 250 μg | 4500 | |
Dnmt1-Trap | Chromo tek | dta-10 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 10 rxns | 2000 |
Chromo tek | dta-20 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | dta-100 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | dta-200 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 200 rxns | 48240 | |
Chromo tek | dta-400 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | dtak-20 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose, kit | 20rxns | 8400 | |
Chromo tek | dt-250 | Dnmt1-Trap,freeprotein | 250μg | 4500 | |
Binding Controls | Chromo tek | bab-20 | Blocked agarose beads (binding control) | 500 μl (20 rxns) | 1500 |
Chromo tek | bmp-20 | Blocked magnetic particles ( binding control) | 500 μ l ( 20 rxns) | 1500 |
產(chǎn)品二：
Nano-booster是利用Atto公司的熒光素共價結合到特異性GFP抗體上；當GFP 融合蛋白信號比較弱的時候，或者熒光蛋白變性后，具有再激活的作用。
在研究活細胞中蛋白定位和動力學的過程中是不是會有如下的困惑：
1.固定樣品中細胞表達的熒光融合蛋白信號強度在生理表達水平通常很低？
2.熒光蛋白的耐光性和量子效率達不到超分辨顯微鏡的要求（如：3D-SIM, STED或 STORM/ PALM）？
3.許多細胞生物學方法如Hcl處理的BrdU檢測，EdU-Click-It處理或者熱變性的熒光原位雜交（FISH）會干擾熒光融合蛋白信號的檢測，需要重新激活GFP 信號？
優(yōu)點：
優(yōu)點一：抗體好---------Nano-Boostern 采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段（VHHS）；具有分子量小（15Kda）、穩(wěn)定（70℃仍保持穩(wěn)定），高親和力（高特異性性結合GFP蛋白），無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點等優(yōu)點；GFP抗體可以特異性結合綠色熒光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不與RFP衍生蛋白結合。
優(yōu)點二：Atto公司的熒光素，具有增強熒光的作用；
優(yōu)點三：作用效果好：
1、作為熒光增強劑使用；
2、對變性熒光蛋白具有再激活作用；
3、不僅能夠增強信號，還能夠增加熒光蛋白熒光穩(wěn)定性。
優(yōu)點四：產(chǎn)品多：不僅有GFP booster，還有RFP booster；
Nano Booster 產(chǎn)品應用：
1、產(chǎn)品實驗方法：免疫熒光（IF）,免疫組化（IHC）；
2、產(chǎn)品使用材料：細胞系，組織切片；
3、產(chǎn)品應用方向：熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，超分辨率顯微鏡（3D-SIM，PALM, STED,STORM）；
實驗結果改進示例：
實驗應用：
上圖：比較 HeLa 細胞系核表達的GFP-融合蛋白，GFP 信號增強（G FP-Booster_Atto488使用前和使用后）由用戶確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。
EdU-Click-iT? 處理會導致GFP 信號的毀壞。 GFP-Booster標記了GFP 融合蛋白，因此有激活和加強熒光信號的作用(稀釋比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。下圖：GFP-Dnmt1 融合蛋白，三色熒光檢測，同時檢測 紅色：5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信號；綠色，結合了GFP Booster 信號；藍色，DAPI 信號（在EdU-Click-iT? 處理后GFP Booster）
Nano-booster主要產(chǎn)品見下表：
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| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 價格 |
GFP-Booster | Chromo tek | gba488-TS | GFP-Booster_atto488-TS | 50 μg | 2500 |
Chromo tek | gba488 | GFP-Booster_atto488 | 100 μg | 5400 | |
Chromo tek | gba-647N | GFP-Booster-Atto 647N | 100 μg | 詢價 | |
Chromo tek | gbdl-650-TS | GFP-Booster- Atto 647N | 50 μg | 詢價 | |
Chromo tek | gba-594 | GFP-Booster-Atto 594 | 100 μg | 詢價 | |
RFP-Booster | Chromo tek | rba594-TS | RFP Booster atto594 TS | 50u g | 2500 |
Chromo tek | rba594 | RFP-Booster_atto594 | 100 μg | 5400 | |
Chromo tek | rbdl-650-TS | RFP-Booster- Atto 650ts | 50 μg | 詢價 | |
Chromo tek | rba-700 | RFP-Booster-Atto 700 | 100 μg | 詢價 | |
Chromo tek | rba-488 | RFP-Booster-Atto 488 | 100 μg | 詢價 |
備注：Invtrogen新推出的Click-iT? EdU檢測也是以檢測新合成DNA中摻入的核苷類似物為基礎，但該方法所采用的核苷類似物是EdU，而且不是通過抗體檢測，而是基于一個click反應 --銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應。Click-iT檢測避免了BrdU檢測所需的苛刻處理條件，可避免DNA變性，維持樣本的形態(tài)，因而提供了一種更可靠且更簡單的方法進行細胞增殖檢測。
DAPI，是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料，常用與熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。當DAPI與雙股DNA結合時，大吸收波長為358nm，大發(fā)射波長為461nm，其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。 所以不會影響綠色熒光蛋白的觀測。
產(chǎn)品三：Chromobodies
ChromoTek公司的Chromobodies?是一種新的極其微小的細胞內(nèi)功能抗體。它是基于融合有熒光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的來自羊駱抗體重鏈的抗原結合域結構(VHH)。和普通抗體不同的是，這些創(chuàng)新的熒光納米探針可以使活細胞的結構和進程實時分析和可視化。因此，Chromobodies? 是做研究細胞內(nèi)研究包含高含量分析（HCA）的一種新的理想試劑。
除了穩(wěn)定細胞株，你也可以得到Chromobody?質粒，它允許你創(chuàng)建自己的細胞系或瞬時表達Chromobody?。
所有Chromobody?結合域都是經(jīng)過精心挑選，以不干擾內(nèi)源性蛋白質的功能，并提供了*的機會來標記活細胞中天然蛋白。
產(chǎn)品形式：質粒或者細胞系產(chǎn)品。
Chromobodies系列產(chǎn)品見下表：
Actin Chromobody
貨號 | Chromo tek | 品名 | 規(guī)格 | 價格 |
dcg | Chromo tek | Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-GFP | 20μg | 14900 |
dcr | Chromo tek | Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-RFP | 20μg | 14900 |
ccg | Chromo tek | Cell Cycle Chromobody? plasmid αPCNA GFP | 20 μg | 14900 |
ccr | Chromo tek | Cell Cycle Chromobody? plasmid PCNA RFP | 20 μg | 14900 |
lcg | Chromo tek | Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-GFP | 20 μg | 14900 |
lcr | Chromo tek | Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-RFP | 20 μg | 14900 |
acg | Chromo tek | Actin Chromobody? plasmid, αActin-GFP | 20 μg | 14900 |
acr | Chromo tek | Actin Chromobody? plasmid, αActin-RFP | 20 μg | 14900 |
產(chǎn)品系列四：
ChromoTek推出一系列高質量常見抗體見下表：
熒光標簽抗體
貨號 | 品牌 | 品名 | 規(guī)格 | 價格 |
3f5 | Chromo tek | RFP antibody mouse monoclonal | 100 μg | 3900 |
5f8 | Chromo tek | RFP antibody rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
3h9 | Chromo tek | GFP antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
標簽抗體
貨號 | 品牌 | 品名 | 規(guī)格 | 價格 |
6g9 | Chromo tek | GST antibody, rat monoclonal | 100 μ l | 3900 |
6f7 | Chromo tek | FLAG antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
9E1 | Chromo tek | c-Myc antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
7c9 | Chromo tek | HA antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
目的蛋白抗體
貨號 | 品牌 | 品名 | 規(guī)格 | 價格 |
2e8 | Chromo tek | Dnmt1antibody,ratmonoclonal | 500μl | 4900 |
2e8ts | Chromo tek | Dnmt1antibody,ratmonoclonal | 125μl | 2000 |
16d10 | Chromo tek | PCNA antibody rat monoclonal | 100 μg | 4900 |
16d10ts | Chromo tek | PCNA antibody rat monoclonal | 25 μg | 2000 |
4b8 | Chromo tek | Ago1 antibody, rat monoclonal | 100 μg | 5400 |
4b8ts | Chromo tek | Ago1 antibody, rat monoclonal | 25 μg | 2000 |
11a9 | Chromo tek | Ago2 antibody, rat monoclonal | 100 μg | 5400 |
11a9ts | Chromo tek | Ago2 antibody, rat monoclonal | 25 μg | 2000 |
1c7 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD | 5 ml | 5400 |
1c7ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD | 1 ml | 2000 |
3d12 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1 | 5 ml | 5400 |
3d12ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1 | 1 ml | 2000 |
3e10 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 2 | 5 ml | 5400 |
3e10ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 2 | 1 ml | 2000 |
6d7 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4 | 5 ml | 5400 |
6d7ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4 | 1 ml | 2000 |
3e8 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 5 | 5 ml | 5400 |
3e8ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 5 | 1 ml | 2000 |
4e12 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 7 | 5 ml | 5400 |
4e12ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 7 | 1 ml | 2000 |
