invivogen ant-bl-05說(shuō)明書(shū)
Selective antibiotic for the bsr, bls, or BSD genes | 50 mg (5 x 1 ml) 100 mg (10 x 1 ml) 500 mg (50 ml bottle) 500 mg (50 x 1 ml) | ant-bl-05 ant-bl-1 ant-bl-5b ant-bl-5 |
| Blasticidin (powder) | Unit size | Cat. code |
|---|---|---|
Selective antibiotic for the bsr, bls, or BSD genes | 1 g | ant-bl-10p |
殺稻瘟素是一種有效的選擇抗生素，可作用于真核細(xì)胞和原核細(xì)胞。
殺 稻瘟素是一種從灰色產(chǎn)色鏈霉菌中分離的肽基核苷抗生素，通過(guò)干擾核糖體機(jī)制中的肽鍵形成來(lái)抑制蛋白質(zhì)合成。
對(duì)殺稻瘟素的抗性是由蠟狀芽孢桿菌(bsr)的殺稻瘟素抗性基因賦予的，該基因編碼殺稻瘟素-S 脫氨酶 [1]。
來(lái)自鏈輪菌[2] 的殺稻瘟素S 乙酰轉(zhuǎn)移酶基因 (bls)和來(lái)自土曲霉[3]的殺稻瘟素 S 脫氨酶基因 (BSD)也賦予了對(duì)殺稻瘟素的抗性。
通常，哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì) 1-10 µg/ml 的殺稻瘟素濃度和細(xì)菌對(duì) 25-100 µg/ml 的濃度敏感。
由殺稻瘟素誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡迅速發(fā)生，允許在一周內(nèi)選擇攜帶殺稻瘟素抗性基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。
參考：
1. Izumi M. 等人，1991. 殺稻瘟素 S 抗性基因 (bsr)：哺乳動(dòng)物細(xì)胞的新選擇標(biāo)記。Exp.Cell Res.197:229-33。
2. Perez-Gonalez J. 等人，1990 年。編碼來(lái)自鏈輪菌屬的殺稻瘟素 S 乙酰轉(zhuǎn)移酶的基因的克隆和表征。基因。86:129-34。
3. Kimura M. 等人，1994. 土曲霉 (BSD) 中的殺稻瘟素 S 脫氨酶基因：一種用于轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的新耐藥基因。生物化學(xué)。生物物理學(xué)。學(xué)報(bào)。1219:653-9。
殺稻瘟素產(chǎn)品濃度： 10 mg/ml
質(zhì)量控制：每個(gè)批次都經(jīng)過(guò)*測(cè)試，以確保沒(méi)有批次間的差異。
純度： ≥ 95% (HPLC)
內(nèi)毒素水平： < 1 EU/mg
理化特性： pH值、外觀
細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試：在殺稻瘟素敏感和抗稻瘟素的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中驗(yàn)證了效力
痕量污染物的非細(xì)胞毒性：在殺稻瘟素抗性細(xì)胞中證實(shí)沒(méi)有長(zhǎng)期影響
殺稻瘟素鹽酸鹽以無(wú)菌過(guò)濾溶液的形式提供，濃度為 10 mg/ml，溶于 HEPES 緩沖液。
該產(chǎn)品有四種包裝尺寸：
ant-bl-05： 5 x 1 毫升（50 毫克）
ant-bl-1： 10 x 1 毫升（100 毫克）
ant-bl-5： 50 x 1 毫升（500 毫克）
ant-bl-5b： 1 x 50 毫升（500 毫克）
殺稻瘟素鹽酸鹽也以粉末形式提供：
ant-bl-10p： 1 克（粉末）
殺稻瘟素在室溫下運(yùn)輸。
收到后應(yīng)在 4°C 或 -20°C 下儲(chǔ)存。
殺稻瘟素是一種有害化合物。有關(guān)操作說(shuō)明，請(qǐng)參閱安全數(shù)據(jù)表。
用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的殺稻瘟素的工作濃度從 1 到 10 μg/ml 不等，在少數(shù)情況下可達(dá) 30 μg/ml。
在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)中，我們建議確定殺死宿主細(xì)胞系所需的最佳抗生素濃度。
處理后，細(xì)胞死亡迅速發(fā)生，允許在轉(zhuǎn)染后短短 7 天內(nèi)選擇帶有bsr或 BSD 基因的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
下面列出了在哺乳動(dòng)物細(xì)胞的一些例子中選擇的殺稻瘟素的建議濃度。
細(xì)胞系 | 中等的 | 殺稻瘟素濃 | 參考 |
|---|---|---|---|
CHO（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞） | DMEM | 5-10 微克/毫升 | 1,2 |
| HEK293（人胚胎腎細(xì)胞） | DMEM | 5-15 微克/毫升 | 3、4 |
| HeLa（人類子宮細(xì)胞） | DMEM | 2.5-10 微克/毫升 | 5、6 |
| Neuro2a（小鼠成神經(jīng)細(xì)胞） | DMEM | 30微克/毫升 | 7 |
| THP-1（人類單核細(xì)胞） | RPMI | 10 微克/毫升 | 8 |
參考：
1. Dorgham K. 等人，2009 年。一種具有抗炎活性的工程化 CX3CR1 拮抗劑。J Leukoc 生物學(xué)。86（4）：903-11。
2. Le Bon L. 等人，2014 年。邊緣蛋白調(diào)節(jié) Notch-配體順式和反式相互作用以信號(hào)狀態(tài)。eLife Sci，3：e02950。
3. Tomecki R. 等人，2014 年。多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的 hDIS3 突變導(dǎo)致細(xì)胞 RNA 代謝紊亂，并建議 hDIS3 PIN 域作為潛在的藥物靶點(diǎn)。核酸研究。42:1270-90。
4. Edbauer D. 等，2004。nicastrin 和早老素的共表達(dá)挽救了 APH-1.J Biol Chem 的功能喪失突變體。279:37311-5。
5. Khandelia P. 等人，2011 年。用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中短發(fā)夾 RNA 干擾和轉(zhuǎn)基因的流線型平臺(tái)。PNAS 108:12799-804。
6. Lee HK.et al., 2007. β-內(nèi)酰胺酶互補(bǔ)在 Toll 樣受體信號(hào)抑制劑的高通量篩選中的應(yīng)用。摩爾藥學(xué)。72:868-75。
7. Matsumoto G. 等人，2011。p62/SQSTM1 的絲氨酸 403 磷酸化調(diào)節(jié)泛素化蛋白的選擇性自噬清除。摩爾細(xì)胞。44:279-89。
8. Schepetkin IA。et al., 2009. 從 Epilobium angustifolium 中分離的 oenothein B 的免疫調(diào)節(jié)活性。J免疫學(xué)。183:6754-66。
殺稻瘟素的儲(chǔ)存方法是什么？
殺稻瘟素在室溫下運(yùn)輸。收到后，應(yīng)在 4°C 下短期儲(chǔ)存或在 -20°C 下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。避免重復(fù)的凍融循環(huán)。有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上注明。
殺稻瘟菌素溶液打開(kāi)后，可在 -20°C 下保持穩(wěn)定 1 年，避免重復(fù)凍融循環(huán)，如果保存在無(wú)菌條件下，可在 4°C 下保存 3 個(gè)月。
具體而言，對(duì)于殺稻瘟素粉末，原液濃度必須為 10 mg/ml，等分試樣可在 -20°C 下保存 1 年。請(qǐng)注意，如果等分試樣的濃度低于 10 mg/ml，我們無(wú)法保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。重要的是，避免重復(fù)的凍融循環(huán)。
殺稻瘟素在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的選擇濃度是多少？
用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的殺稻瘟素的工作濃度在 1 - 10 μg/ml 之間變化，少數(shù)報(bào)道的案例高達(dá) 30 μg/ml。在初始實(shí)驗(yàn)中，我們建議確定殺死宿主細(xì)胞系所需的殺稻瘟素的最佳濃度。
有關(guān)更多詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱該產(chǎn)品的技術(shù)數(shù)據(jù)表。
大腸桿菌中殺稻瘟素的選擇濃度是多少？
殺稻瘟素在大腸桿菌中的活性較低，但可以在補(bǔ)充有 100 μg/ml 殺稻瘟素的低鹽 LB 瓊脂培養(yǎng)基 (pH 8) 上選擇對(duì)殺稻瘟素有抗性的轉(zhuǎn)化體。
請(qǐng)注意：高 pH 值（即 8）會(huì)增強(qiáng)殺稻瘟素的活性。
